بروسلوز يا تب مالت بيماري است كه از حيوانات آلوده به انسان انتقال مي يابد. شش گونه كلاسيك شامل بروسلا آبورتوس، مليتنسيس، سوئيس، كنيس، نئوتومه و اويس وجود دارد(1)(3)(7 (در سالهاي اخير چهار گونه جديد شامل بروسلا سته ايي، ماريس، پني پدياليس و اينوپيناتا گزارش شده است. (5(روش هاي كلاسيك و استاندارد براي تشخيص بيماري بروسلوز شامل جداسازي باكتري بروسلوز از نمونه هاي كلينيكي و خالص سازي آن همچنين روشهاي سرولوژي بر اساس تماس با عامل بيماري و رديابي آنتي بادي هاي توليد شده مي باشند.(3) (4(اين روش ها علاوه بر نياز به زمان طولاني جهت قرائت نتايج و خطر آلودگي پرسنل آزمايشگاه، داراي حساسيت و اختصاصيت پايين مي باشند. (2(در سالهاي اخير روش هاي مولكولي زيادي براي تشخيص اي باكتري مورد استفاده قرار گرفته اند. روش PCR Time Real از اين نظر كه نيازمند صرف زمان كم و داراي حساسيت و اختصاصيت بالايي مي باشد، در تشخيص اين بيماري بسيار مفيد مي باشد. مواد و روش ها: نمونه هاي مورد استفاده در اين مطالعه شامل سويه استاندارد و واكسينال بروسلا آبورتوس، مليتنسيس، سوئيس، نئوتومه و 15 ايزوله بروسلا آبورتوس جداشده از شير گاو مي باشد

كشت و تايپينگ: تمام نمونه ها ابتدا در محيط بروسلا آگار كشت و در دماي 37 درجه به مدت 5 روز گرمخانه گذاري گرديد. سپس مطابق دستوالعمل استاندارد فازتايپينگ انجام پذيرفت.(8 ( استخراج DNA :در اين مطالعه جهت استخراج DNA ژنومي باكتري بروسلا از كيت استخراج Pure High .گرديد استفاده Roche شركت محصول PCR Template preparation Kit طراحي پرايمر:به منظور طراحي پرايمر مطالعات بيوانفورماتيك جهت دستيابي به جايگاه هاي اختصاصي براي تمايز گونه بروسلا آبورتوس آغاز گرديد. در اين فاز كروموزوم 1 بروسلا به طول 2122000 جفت باز به صورت مقايسه اي ارزيابي گرديد در اين مطالعه تلاش براي يافتن جايگاههايي كه پوشش دهنده كامل بايووارهاي درون گونه باشد صورت گرفت نتيجتا يك جايگاه كاملا اختصاصي براي تمايز بايووار هاي بروسلا آبورتوس حاصل گرديد. واكنش PCR Time Real :مواد استفاده شده در واكنش شامل 10 ميكرولتر بافر 2x ،1 ميكرولتر از هر پرايمر معادل 5 پيكومول، 1 ميكروليتر از از DNA الگو معادل 5 نانوگرم در حجم نهايي 20 ميكروليتر مي باشد. C 95 ◦ شرايط زماني و دمايي شامل 2 دقيقه Dnaturation و تعداد 30 سيكل شامل 15 ثانيه Dnaturation در C 95 مي ◦ C 60 و 15 ثانيه ◦ C 95 ،يك دقيقه ◦ C 68 .منحني ذوب شامل 15 ثانيه ◦ و 40 ثانيه Extention در باشد. نتايج: در اين مطالعه قطعه 215 نوكلئوتيدي بر اساس منحني ذوب حاصله در دماي 85 درجه سانتي گراد داراي يك الگوي صعودي كاملا اختصاصي مي باشدشكل(1 ( نتايج نشان داد كه با استفاده از اين پرايمر ها مي توان باكتري بروسلا گونه آبورتوس به صورت اختصاصي از ساير گونه ها تمايز داد و در واقع نتايج تاييد كننده روش كلاسيك فاژتايپينگ بود. حساسيت تست: با كمك اين روش مي توان تا مقدار 400 فمتو گرم از DNA الگو را تشخيص داد.