بروسلوز يك بيماري عفوني باكتريايي است كه توسط ميكروارگانيسمي از جنس بروسلا ايجاد مي شود. اين باكتري گونه هاي مختلفي از حيوانات را مبتلا ساخته و يكي از عوامل مهم سقط جنين در گوسفند و بز مي باشد. بروسلوز يكي از مهمترين بيماريهاي زئونوز محسوب شده و در اغلب كشورها از جمله كشورهاي 1 2و3 منطقه مديترانه و خاورميانه از جمله ايران بصورت اندميك شايع مي باشد. كه با شيوع متفاوت درجمعيت دامي و انسان از نقاط مختلف كشور گزارش شده است. گرچه تماس با دام و فرآورده هاي آلوده به باكتري بروسلا بعنوان مهمترين عوامل خطر ابتلا به بروسلوز شناخته شده اند، ولي شرايط اقليمي و نوع دامداري، فرهنگ دامپروري و رفتار غذائي مردم هر منطقه در شيوه استفاده از فراورده هاي دامي و همچنين گونه و بايوتيپ هاي شايع عامل پاتوژن در هر ناحيه جغرافيائي، عواملي هستند كه الگوي بروز بيماري را در جوامع مختلف، متفاوت نشان مي دهد. با توجه به اينكه بيماري تب مالت تقريبا در جمعيت عشاير و روستائيان لكاليزه شده است، مطالعه حاضر به منظور تشخيص گونه هاي مختلف باكتري بروسلا در جمعيت عشاير استان، صورت گرفته است. مواد و روشها: با توجه به آمار عشاير و پراكندگي آنها در مناطق ييلاق استان، بررسي هاي صورت گرفته بر روي اين جمعيت و همچنين گزارشات ثبت شده از آمار موارد بيماري تب مالت در عشاير، براي تعيين حجمنمونه، با استفاده از داده هاي مكاني (GPS (و ثبت اين داده ها در نرم افزار GIS ،400خانوار عشاير به صورت راندوم در يازده شهرستان استان؛(آباده، اقليد، بوانات، پاسارگاد، خرامه، خرمبيد، سپيدان، سروستان، فيروزآباد، شيراز، كوار) انتخاب گرديد. هر خانوار به صورت يك خوشه در نظر گرفته شد و از سرپرست و تمامي اعضاي خانواده خونگيري به عمل آمد. همچنين فرمي طراحي و كليه اطلاعات ضروري خانوار در فرم ثبت و جمع آوري گرديد سپس سرم آنها جدا و در لوله هاي در پيچ دار و با حفظ زنجيره سرد به آزمايشگاه رفرال مركز بهداشت استان ارسال گردد. بر روي همه نمونه ها اول رپيد تست انجام شد و براي موارد مثبت، رايت لوله ايي و 2ME چك گرديد بر مبناي رايت مساوي و يا بيشتر 160/1 و 2ME بيشتر يا مساوي 40/1 ،موارد مثبت تشخيص داده شد. موارد مثبت براي تعيين گونه، به روش PCR مورد بررسي قرار گرفت. كليه داده ها در نرم افزار 5.SPSS11 وارد و مورد تجزيه و تحليل قرار گرفت . نتايج: جمعا تعداد 1641 خونگيري انجام شد و پس از آزمايش تعداد 165) 10درصد نمونه ها )مورد مثبت ، و از موارد مثبت تعداد 43 نمونه مورد بررسي PCR قرار گرفت كه 31 )72 (%گونه مليتنسيس ، 8) 19 (%گونه آبورتوس و 4) 9 (%نامعلوم تشخيص داده شد. بحث و نتيجه گيري: در حال حاضر بروسلوز انساني، در كشورهاي صنعتي، بيشتر در كارگران كشتارگاه ها و . در كشورايران 4 قصابان، عارض مي گردد و بروسلا مليتنسيس، شايعترين گونه بروسلا در سطح جهان مي باشد 5 نيز، در مطالعات صورت گرفته بيشترين گونه تشخيص داده شده از نوع مليتنسيس مي باشد. با توجه به ، اينكه، بيشترين موارد گزارش شده تب مالت در كشور در جمعيت عشاير و روستائيان مي باشد و اقتصاد عشاير نيز بر اساس نگهداري و پرورش دامهاي سبك مي باشد و از طرفي گوسفند و بز در انتقال باكتري بروسلا مليتنسيس، بيشتر نقش دارند، به نظر مي رسد واكسيناسيون دامهاي سبك نيز بايستي بصورت فعال، در اولويت سازمان دامپزشكي كشور قرار گيرد. هر چند مسائلي مانند، پراكندگي، صعب العبور بودن مكانهاي اسكان عشاير، تماس بسيار نزديك با دام، بحث امنيت و حفظ دام از سرقت و بالطبع نگهداري دام در مجاور محل سكونت، همچنين كمبود اعتبارات، تجهيزات و نيروي انساني، كنترل بيماري تب مالت را با مشكل روبه رو كرده است، اما لازم است در سطح كلان، به اين مشكل، توجه ويزه گردد و با تامين و اختصاص اعتبار لازم، برنامه پيشگيري و حذف آلودگي از دامهاي سبك، بخصوص در روستا و عشاير نيز بصورت فعال و با جديت، پيگيري و اجرا گردد. 

زمينه و هدف؛ بروسلوزيس يك عامل عمده زئونوز بوده و استان كردستان در ايران يكي از مناطق اندميك براي شيوع اين بيماري است .هدف از اين مطالعه جداسازي بروسلا از بيماران بروسلوزيس و تعيين گونه هاي اين باكتري به منظور بررسي شيوع اين سويه ها در استان كردستان مي باشد. روش بررسي : از 60 بيمار بروسلوز داراي علايم مراجعه كننده به بيمارستان توحيد سنندج نمونه گيري از خون انجام گرفت .هر نمونه در محيط كشت خون (BACTEC (تلقيح شده و در شرايط دمايي C◦37 به مدت 5 روز قرار گرفت .پس از اين مدت، نمونه ها روي محيط بروسلا آگار به مدت 3 روز كشت داده شد سپس براي تشخيص باكتري هاي رشد كرده، روش PCR و كاتالاز، اكسيداز، H2S تست هاي اوره آز، توليد رنگ آميزي گرم و رشد روي محيط هاي داراي رقت هاي مختلف از رنگهاي تايونين و فوشين انجام شد .همچنين از روش آگلوتيناسيون اختصاصي براي تعيين گونه اين باكتريها نيزاستفاده گرديد. يافته ها : از 60 نمونه خون گرفته شده از بيماران بروسلوزي، 18 سوش بروسلا جداسازي شد .پس از انجام تستهاي بيوشيميايي، كل باكتريهاي جدا شده به عنوان بروسلا ملي تنسيس با بيووار يك تا سه شناخته شد . نتايج آگلوتيناسيون نشان داد كه 14 سوش جزوبيوار 1 بروسلا ملي تن سيس و 4 سوش جزو بيوار 3 مي باشند. نتيجه گيري : اين مطالعه نشان مي دهد كه شيوع بروسلوز با عامل بروسلا ملي تن سيس در استان كردستان بالا بوده و تلاش براي ريشه كن سازي اين باكتري در اين منطقه بايد اختصاصي براي اين باكتري باشد

اختراع و معرفی روش Real time PCR سبب انقلابی در روشهای زیستشناسی مولکولی، خصوصاً مطالعات آنالیز
بیان ژن گردیده است . از مهمترین مزایای این روش میتوان به حساسیت بالا و کمیت سنجی دقیق اشاره نمود ) et Jain 2006 al., ) . روش Real time PCR بهعنوان روشی مناسب و دقیق برای مطالعه بیان ژن استفاده میشود. اساس این
روش مبتنی بر سنجش کمی نسخههای تکثیرشده در PCR از طریق مرحله تصاعدی واکنش و سنجش میزان نشر نور
فلورسانس میباشد )منصوری و همکاران، 1811 (. این روش ابتدا توسط Higuchi و همکاران در سال 1991 معرفی شد.
ازآنجاییکه اسیدنوکلئیک تکثیر یافته و مراحل تشخیص در یک محیط بسته انجام میشود؛ ریسک آلودگی نسبت به روشهای
کلاسیک و معمولی PCR کاهش مییابد. سرعت در انجام آزمایش، حذف مرحله ردیابی محصول پس از PCR ، مشاهده
لحظه به لحظه واکنش و قطع آن در هر زمان، حساسیت و اختصاصیت بالا در روش Real time PCR باعث تحول عظیم
در تشخیص مولکولی میکروارگانیسمها، بررسی بیان ژنها، ارزیابی درمان، تشخیص جهشها، افتراق آللی و بسیاری از
کاربردهای دیگر شده است. همچنین این روش در تشخیص چندشکلیهای ناشی از جهشهای تک نوکلئوتیدی (SNP)
کاربرد دارد (Klein, 2002) .
تمامی اصول و واکنشگرهایی که برای یک PCR معمولی موردنیاز است؛ در PCRReal time هم بکار میرود اما
یک گزارشگر فلورسنت نیز در واکنش حضور دارد. این گزارشگرها بهگونهای طراحی میشوند که در صورت تکثیر محصول،
نور تولید کنند. لذا افزایش شدت نور ثبتشده در دستگاه با میزان محصول بهدستآمده نسبت مستقیم دارد. معمولاً اگر واکنشبهینهسازی شده باشد، در 8 تا 11 چرخه ابتدایی تغییر چندانی در شدت فلورسنت دیده نمیشود. که به این ناحیه، خط پایهگویند. ولی در ادامه، شدت فلورسنت افزایش مییابد. مقدار سیگنال تولیدی در ابتدای مرحله دوم بهصورت نمایی افزایش
مییابد و زمانی که تکثیر از فاز نمایی به سمت فاز خطی پیش میرود، تعداد مولکولهای پلیمراز محدود میشوند و کمکم
واکنش Real time PCR به اتمام میرسد 2006) ,et al.(Kubista . بهطورکلی Real time PCR چند مرحله دارد:
فاز اول (Linear ground): باوجوداینکه محصول دو رشتهای وجود دارد ولی نور آن قابلردیابی نیست.
فاز دوم (Early exponential) : محصول دو رشتهای در هر چرخه دو برابر میشود و رشد نمایی مربوط به واکنش شروع
میشود و میزان فلورسنس بهطور عمدهای نسبت به فاز اول افزایش مییابد.
فاز سوم linear)-(Log : ترکیبات واکنش و کارایی آنها رو به اتمام است.
فاز چهارم (Plateau) : ترکیبات و کارایی آنها از بین میروند و افزایش در میزان فلورسنت مشاهده نمیشود ,(